阿拉丁SDS-PAGE蛋白电泳试剂

十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种常用的蛋白电泳。经典SDS-PAGE蛋白电泳凝胶，由两种不同浓度的丙烯酰胺溶液形成的不连续凝胶（浓缩胶和分离胶）。

1、凝胶材质

聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺单体聚合而成的聚合物，通常与双丙烯酰胺或N,N'-亚甲基双丙烯酰胺结合使用。交联剂双丙烯酰胺含有两个单位通过亚甲基桥连的丙烯酰胺。聚合是被TEMED催化（N,N,N,N-四甲基乙二胺）的自由基反应-通常由过硫酸铵(APS)引发。在既定温度下，APS和/或TEMED的浓度决定了聚合速率。
蛋白电泳，通常采用30%或30%+(%T)的聚丙烯酰胺凝胶。通过改变基质的百分比来调整孔径大小，从而有效分离不同大小的蛋白。聚丙烯酰胺凝胶的含量与蛋白大小成反比。

分离胶中丙烯酰胺比例和分离蛋白大小的关系

丙烯酰胺比例	8%	10%	12.5%	15%	20%
分离蛋白范围	25-200 KDa	15-100 KDa	10-70 KDa	6-60 KDa	4-40 KDa

2、变性剂

SDS是一种阴离子去污剂。SDS-PAGE蛋白电泳中,SDS与蛋白质紧密集合,将蛋白质的氢键、疏水键打开,引起蛋白质构想的改变,其所带的电荷与蛋白质有大大的差异,因此消除或掩盖了蛋白质本身的电荷。电泳时的蛋白的迁移率就不在受蛋白质原有的电荷和形状的影响,而只与蛋白质大小有关。

常用SDS-PAGE蛋白电泳分离胶和浓缩胶配置表

溶液成分（mL)	5%浓缩胶	不同浓度的分离胶
?	?	6%	8%	10%	12%	15%
水	6.8	20	16.7	13.3	10	5
30%Acr-Bis(29:1)	1.7	10	13.3	16.7	20	25
1M Tris(pH=8.8）	-	19	19	19	19	19
1M Tris(pH=6.8）	1.25	-	-	-	-	-
10% SDS	0.1	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
10% 过硫酸按	0.1	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
TEMED	0.01	0.04	0.03	0.02	0.02	0.02
总体积（mL)	10	50	50	50	50	50

凝胶配置试剂

产品号	名称	级别	Cas	规格
A108470	丙烯酰胺	电泳专用级	79-06-1	25g,100g,500g
M104026	N，N′-亚甲基双丙烯酰胺	电泳级, ≥99.0% (T)	110-26-9?	25g,100g,500g
T105496	四甲基乙二胺(TEMED)	用于电泳,99%	110-18-9?	25ml，100ml
A112447	过硫酸铵APS	99.99% metals basis	7727-54-0	25g,100g,500g
S108346	十二烷基硫酸钠(SDS)	电泳专用,≥98.5% (GC)	151-21-3	25g,100g,500g，2.5Kg

3、电泳缓冲液

经典SDS-PAGE蛋白电泳缓冲体系（Tris Glycine）工作原理：

上层浓缩胶，由较低浓度丙烯酰胺溶液形成（一般丙烯酰胺浓度为4-6%）。浓缩胶体系中的氯离子（Cl-）作为先导离子，以较快的速度向正极迁移。在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域，加快了蛋白质和甘氨酸离子（Gly)的迁移。由于浓缩胶中的pH较低（一般pH=6.8），甘氨酸的负离子效应不明显，作为尾随离子，迁移较慢。所以，进入分离胶之前，蛋白堆积在氯离子、甘氨酸离子之间，有利于提高电泳的分辨率。

进入下层分离胶后，pH升高(分离胶通常pH=8.8)，使甘氨酸解离成负离子效应增加，使甘氨酸的迁移超过蛋白质。另外，由于分离胶中的丙烯酰胺浓度明显高于浓缩胶，一般丙烯酰胺浓度为8-15%。蛋白质便在一个较均一的pH和电压梯度环境中，按其性质分离。在非变性蛋白凝胶电泳中，按荷质比分离蛋白。在SDS-PAGE变性蛋白凝胶电泳，按相对分子质量大小分离蛋白质。

Tris Glycine缓冲体系电泳缓冲液组分

组分	Tris base	甘氨酸	SDS	去离子水	(pH 8.3)
浓度	25 mM	192mM	0.10%	—

电泳缓冲液配置试剂

产品号	名称	级别	Cas	规格
T110601	三(羟甲基)氨基甲烷	分子生物学级,≥99.9%(T)	77-86-1?	500g，1Kg
A110752	甘氨酸	用于电泳,≥99%	56-40-6	500g，2.5Kg
S108346	十二烷基硫酸钠(SDS)	电泳专用,≥98.5% (GC)	151-21-3	25g,100g,500g，2.5Kg

除了(Tris-甘氨酸)缓冲系统，聚丙烯凝胶蛋白电泳缓冲系统也衍生出了一系列进化缓冲系统。Tricine缓冲系统中，用Tricine替代了传统Tris-甘氨酸系统中的甘氨酸，使得低分子量蛋白（2-20 kDa）电泳具有更高的分辨率。Tris-醋酸盐凝胶可以用于大分子量蛋白（＜500 kDa）的分离。

4、蛋白染料

考马斯亮蓝R250染料是SDS-PAGE中最常用的蛋白染色之一。蛋白质-染料复合物在549纳米处有最大的吸收。每个正电荷氨基酸约1.5-3个考马斯亮蓝R250分子将被结合。灵敏度在200-400ng左右。而考马斯亮蓝G250主要应用是Bradford法(测定蛋白质浓度)，但也可以对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色。

蛋白染料

产品号	名称	级别	Cas	规格
C298550	考马斯亮蓝染色液	-	-	100ml
C298551	考马斯亮蓝快速染色液	0.1%（W/V）	-	100ml
B105005	考马斯亮蓝R250	电泳级,≥90 %(HPLC)	6104-59-2?	5g,25g,100g
B104241	考马斯亮蓝G250	70%,用于电泳	6104-58-1?	5g,10g,50g,250g
C298552	考马斯亮蓝脱色液 (40%甲醇，10%冰醋酸)	-	-	100ml

5、上样缓冲液

上样缓冲液通常包含密度成分、SDS、染料、缓冲体系。密度成分帮助样品沉入凝胶孔中，SDS是一种阴离子去污剂，染料则用于指示电泳的进展。对于还原蛋白电泳，还需在上样缓冲液中加入还原剂，降低二硫键的生成。

组分	Tris HCl	甘油	SDS	溴酚蓝	二硫苏糖醇（DTT）	去离子水	(pH 6.8)
浓度	63 mM	10%	2%	0.00%	0.1 M（还原蛋白电泳）	—

上样缓冲液组分

产品号	名称	级别	Cas	规格
T105291	三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris HCl)	用于分子生物学和细胞培养,≥99.0%(AT)	1185-53-1	100g,500g
G118851	甘油	无菌,for molecular biology	56-81-5	100ml
S108346	十二烷基硫酸钠(SDS)	电泳专用,≥98.5% (GC)	151-21-3	25g,100g,500g，2.5Kg
B109645	溴酚蓝	Indicator	115-39-9	10g,25g,50g
D104861	DL-二硫苏糖醇(DTT)	用于电泳,≥99%	3483-12-3	1g,5g,25g