HiFi Seq DNA 聚合酶
库存信息
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货号 (SKU) | 包装规格 | 是否现货 | 价格 | 数量 |
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H292966-50μl | 50μL | 期货 | | |
H292966-250μl | 250μL | 期货 | | |
H292966-1ml | 1ml | 期货 | |
货号 (SKU) | 包装规格 | 是否现货 | 价格 | 数量 |
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H292966-50μl | 50μL | 期货 | | |
H292966-250μl | 250μL | 期货 | | |
H292966-1ml | 1ml | 期货 | |
规格或纯度 | 1U/μL |
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英文名称 | HiFi Seq Hotstart DNA polymerase |
单位定义 | 1 单位(U)HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 活力定义为在 72℃、30 min 内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物,将10 nmol 的dNTPs 掺入酸不溶性沉淀所需的酶量。 |
储存温度 | -20°C储存 |
运输条件 | 超低温冰袋运输 |
产品介绍 |
热激条件:95℃,3 min 外切酶活性:3’→5’ 扩增重数:单重/多重 荧光定量RT-PCR:√ 额外添加AT载体连接:√ 推荐项目:RNA病毒定量、cDNA合成、RNA测序 产品说明: HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 是通过基因工程改造的工程酶,在无需辅助蛋白及额外的 DNA 结合功能域的条件下提高了对 DNA 模板的亲和力。相比于其他野生型的 B 族 DNA 聚合酶,HiFi Seq Hotstart DNA 聚合酶强大的持续合成能力能够显著的提高扩增产物量、扩增速率以及灵敏度,同时长片段扩增和复杂模板的扩增能力(高 AT 或者高 GC 模板)也有明显的提高。 HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 有 5’→3’聚合酶活性和 3’→5’外切酶活性(校对活性),无 5’→3’外切酶活性。强大的3’→5’外切酶活性保证了 DNA 扩增过程中的准确率,HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 保真性是野生型 Taq DNA 聚合酶的100 倍,是其他 B 族 DNA 聚合酶的 10 倍。 产品特点 1、扩增效率高,能够在较少的循环数下得到较高的产物量; 2、保真性高、无明显的碱基偏好性; 3、灵敏度高,可对低至 1ng 起始模板进行富集。 产品内容 HiFi Seq Hotstart DNA polymerase(1U/ul) 5×HiFi seq buffer 10×Enhancer 适用范围 NGS DNA 文库的富集、基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析 PCR 扩增操作流程 1、提前取出 5×HiFi seq buffer、10×Enhancer 置于室温融化,如果有沉淀析出,请彻底混匀溶解后使用,HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 置于冰上备用。 2、按照下表配制 PCR 体系,注意此步骤需于冰浴中操作。 ? ? 1)反应体系可以设置在 10-50μl 之间,试剂使用量可以按照比例调整,不推荐使用>50μl 体系; 2)1×HiFi seq buffer 包含 2.5mM Mg2+(1×),如果体系需要更高浓度的 Mg2+可以额外的添加; (!请注意Mg2+的2+为上角标) 3)在初次测试时,50μl 反应体系建议基因组模板使用量为 10-100ng,稍微复杂模板使用量为 0.1-1ng。 3、按下表设置 PCR 仪反应程序,开启热盖,温度设置于 105℃。 ? ? 1)预变性时间 95℃ 3min 对于常规模板是足够的,对于 GC大于等于70%模板建议将预变性时间延长至 5min; 2)体系中高盐离子浓度会影响 DNA 溶解,为保证复杂 GC 模板能够完全变性,建议将变性温度调整到 98℃。高盐 buffer 同时也会影响引物的退火,优化后的退火温度要略高于常规的 PCR 体系,初次反应建议使用 56℃为退火温度,若反应不理想,则可以每调整 3℃测试一次的方法来确定最适的退火温度; 3)两步法扩增程序,建议退火/延伸范围 65-68℃,延伸时间按 30-60 sec/kb 计算; 4)常规条件下目的片段小于等于1kb,延伸时间按 15sec/kb 计算,当目的片段>1kb,或者要提高产物量,延伸时间按 30 sec/kb 计算; 5)为获得较高的保真性,建议扩增循环数小于等于25cycles,扩增循环数越高,错配率越高。 |