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荧光淬灭


化合物的荧光可以通过一系列过程淬灭,即减少或完全关闭,而不会永久破坏荧光团。因此,荧光淬灭效应降低了荧光强度。一旦淬灭剂被一处或淬灭机制被“关闭”,原始的荧光强度就会重新出现。或者荧光态的激发已经被淬灭剂阻止,或者电子激发态在淬灭剂存在的情况下在没有辐射(即光子发射)的情况下失活至基态。

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在实践中,荧光淬灭被用于许多应用,因为它是一种容易观察或测量的现象。因此,它可以用作分子水平上发生的过程的指示器。例如,分析物的存在或不存在会导致萤光团和淬灭剂之间的距离发生变化,从而导致荧光发生变化。除了荧光强度之外,在某些情况下,寿命也可以用作这种变化的衡量标准。


分子信标

一个众所周知的例子是所谓的“京尼平”、“发夹”或“分子信标”技术。此处,荧光染料和淬灭剂位于DNA单链的末端。末端片段上的几个互补碱基发生杂交,即形成部分DNA双链。因此,DNA的中间部分形成一个环,所得结构类似于发夹。标记物的荧光因淬灭剂的空间接近而被淬灭。如果将与第一条链的碱基序列互补的DNA链添加到溶液中,则这两条链通过所有碱基更强的相互作用而杂交,从而使染料和淬灭剂在空间上分离。这会导致荧光再次出现。根据这一原理,可以设想许多不同的实验,并得出有关分子过程的结论。除了使用燃料和淬灭剂之外,还可以使用两种荧光染料来实现此目的。





聚合酶链式反应

此外类似的方法也用于聚合酶链式反应(PCR)的DNA扩增。这允许指示反应的进展或结束。

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有几种现象可能导致荧光淬灭。基本上有两种不用的类型,但实际上它们经常以混合形式出现。


动态淬灭

能量通过激发的荧光团与淬灭剂分子的碰撞而转移到淬灭剂分子,并最终转化为热量。这种类型的扩散相关过程被称为“碰撞淬灭”。动态荧光淬灭由“Stern-Vollmer方程”描述。


静态淬灭

荧光团和淬灭剂形成“稳定”复合物,永久降低荧光分子的浓度。


浓度淬灭

一个看似微不足道的现象是所谓的浓度淬灭,即浓溶液中类似分子的荧光淬灭。然而,根据条件的不同,观察到的实验结果不一致甚至矛盾。

我们将觐见要讨论有机染料(例如罗丹明)在水溶液中的情况。这主要是几个燃料分子的电子轨道相互作用的静态缔合。这回改变吸收光谱并淬灭荧光。


电子转移

在电子转移淬灭过程中,受激分子与淬灭剂的直接接触也是必要的,即电子从供体转移到受体。这样,恶嗪染料ATTO655、ATTO680和ATTO700的荧光可以被鸟苷、色氨酸和类似化合物非常有效地淬灭。


共振能量转移

在所谓的福斯特共振能量转移(FRET)中,受激工体的能量在没有辐射的情况下转移到附近的受体。这减少了工体的荧光。如果受体是荧光的,它的荧光就会出现,就像它被直接激发一样。如果受体本身不发荧光,则它进接管供体的能量,因此充当荧光淬灭剂或淬灭染料。


ATTO淬灭剂

淬灭剂ATTO540Q、 ATTO575Q、ATTO580Q和ATTO612Q专门通过FRET机制进行淬灭,即,如果荧光团的发射光谱与相关淬灭剂的吸收光谱不重叠,则不会发生荧光淬灭。


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